1932年，韩非跟随父亲南迁上海，就读于上海青年会中学，并参演了话剧《阿Q正传》。1940年，加入上海剧艺社，并在舞台剧《家》中饰演觉慧。

1941年，主演个人首部电影《夜深沉》，由此开启了他的电影演员生涯，该片根据张恨水的同名小说改编；同年，由其出演的剧情电影《乱世风光》上映。1942年，与白虹、周起联合主演剧情电影《玉碎珠圆》。

1944年，与王丹凤合作主演剧情电影《教师万岁》，在片中饰演从师範学校毕业的青年袁铭。1947年，与王丹凤共同主演爱情电影《终身大事》；同年，与蒋天流、张伐联袂主演的家庭喜剧电影《太太万岁》上映，在片中饰演心直口快、行事略显冒失而又喜欢炫耀的陈思瑞。

1948年，与石挥、李丽华联合主演剧情电影《艳阳天》；同年，出演由唐绍华执导的剧情电影《珠光宝气》；，还与白光、周伯勛联合主演了剧情电影《人尽可夫》。1949年，与严俊、白光联合主演剧情电影《血染海棠红》；同年，由其出演的剧情电影《哀乐中年》上映。

1950年，与李丽华合作主演喜剧电影《说谎世界》，在片中饰演爱慕虚荣的公司小职员张庚良；同年，与刘琼、李丽华等联袂主演剧情电影《豪门孽债》；，还与周璇等合作主演文艺电影《花街》。

1951年，与李丽华合作主演爱情电影《误佳期》，在片中饰演专为别人婚丧嫁娶吹喇叭的单身乐手；同年，与夏梦共同主演爱情电影《禁婚记》，在片中饰演因要求加薪未果而气愤辞职的小职员伍启文；，还与王丹凤共同主演了古装电影《瑶池鸳鸯》。

1952年，成为上海电影製片厂的演员；同年，与李清、江桦联合主演喜剧电影《一板之隔》，在片中饰演洋行的打字员陈有庆，他凭藉该片获得中国文化部1949—1955年优秀影片奖个人荣誉奖；，还与陈娟娟搭档主演剧情电影《不知道的父亲》。

1953年，与姜明、夏梦联袂主演喜剧电影《白日梦》；同年，与周璇、吴景平联合主演歌舞电影《彩虹曲》；，还与江桦等共同主演剧情电影《中秋月》，在片中饰演生活拮据的陈明生。1954年，与陶金、凌之浩联袂主演剧情电影《斩断魔爪》，在片中饰演冒充周昌民老友侄儿的台湾国民党特务白秉忠。

1956年，与赵毛、强明等联合出演剧情电影《两个小足球队》。1957年，与张伐、王蓓联合主演剧情电影《幸福》，在片中饰演思想落后的青年工人王家有。1958年，与马骥共同主演剧情电影《小康人家》。

1959年，与赵丹等合作出演古装电影《林则徐》；同年，与孙景璐、阳华联袂主演爱情喜剧电影《乔老爷上轿》，在片中饰演乘船赴京赶考的书生乔溪；，与赵丹等共同出演人物传记电影《聂耳》。1960年，由其参演的剧情电影《六十年代第一春》上映，并担任了该片的编剧。

1962年，与赵子岳、凌元联合主演喜剧电影《锦上添花》，在片中饰演从铁路业余学校调来小桥车站的青年教员段志高；同年，与陈强、程之等共同主演剧情电影《魔术师的奇遇》，在片中饰演魔术师陆幻奇失散多年的儿子阿毛；，还与王丹凤、顾也鲁联合主演了剧情电影《女理髮师》，在片中饰演反对妻子当理髮师的干部贾主任。

1965年，与魏鹤龄、上官云珠联合出演剧情电影《血碑》。1978年，由其出演的剧情电影《儿子，孙子和种子》上映。1980年，与孙景璐、程之共同主演喜剧电影《见面礼》。1981年，出演由桑弧、傅敬恭联合执导的剧情电影《子夜》，该片根据茅盾创作的同名小说改编。1984年，与庞万灵、常贵等联袂主演剧情电影《东方大魔王》，在片中饰演被誉为“东方大魔王”的民间魔术艺人张若松。

韩非的父亲曾在北洋政府交通部任参事，受过新思想的影响。韩非膝下育有一子，取名韩伟。1985年，韩非逝世，享年66岁。

韩非擅长饰演各类反差极大的银幕形象，并且能塑造得惟妙惟肖。如果要从韩非形形色色的银幕形象中概括出一个原型的话，那就是“边缘人”——游离于主流社会秩序之外，想融入其中而又不可得，并且常常在与不同意识形态的协商中遭遇尴尬、无奈、屈辱，抑或是悲喜交集的情境。韩非的表演引人入胜之处在于以极富魅力的方式消解种种窘境，并将其转化成笑料，进而引发观众的共鸣和思索。在电影《太太万岁》中，韩非把心直口快、行事略显冒失而又喜欢炫耀的陈思瑞塑造得活灵活现。在电影《哀乐中年》中，显示了韩非对角色心理的细腻把握。在电影《误佳期》中，韩非出色的演技把“小喇叭”憨直、可爱而又固执的个性展示得惟妙惟肖。在电影《中秋月》中，他一反自己常见的喜剧形象或滑稽作风，以深沉、朴素的表演风格塑造了一个在资本主义制度下苦苦挣扎的“边缘人”（《电影艺术》评）。